오크라 분말의 Quercetin-3-O-Gentiobioside 및 Isoquercitrin의 분석법 개선 및 검증

초록

본 연구에서는 오크라를 이용하여 건강기능식품 개발 시원료의 표준화를 위하여 HPLC-PDA를 이용하여 지표성분 quercetin-3-O-gentiobioside 및 isoquercitrin의 기존 보고된 분석법을 개선하고 분석법에 대한 유효성 검증을 실시하였다. 분석법의 유효성 검증은 ICH 가이드라인에 근거하여 특이성, 직선성, 정확성, 정밀성, 검출한계 및 정량한계를 통해 신뢰성 및 타당성을 검증하였다. HPLC를 이용한 분석방법에서 표준용액의 지표성분 피크 머무름 시간과 오크라 분말 시료의 지표성분 피크 머무름 시간 및spectrum의 확인결과 모두 일치하므로 특이성을 확인하였다. Quercetin-3-O-gentiobioside 및 isoquercitrin의 검량선은 1에 가까운 높은 상관계수 값(0.9999, 0.9999)으로 우수한 직선성을 확인할 수 있었으며 분석에 적합함을 알수 있었다. 농도를 알고 있는 오크라 분말 시료에 표준물질을 저, 중, 고농도로 제조한 후 첨가하여 정밀성 및 정확성을 계산하였다. Quercetin-3-O-gentiobioside 및 isoquercitrin 의 정밀성은 일내, 일간 정밀성으로 확인하였으며, quercetin 3-O-gentiobioside 및 isoquercitrin의 일내 정밀성은 각각0.50-1.48%, 0.77-2.82% 수준으로 확인되었으며, 일간 정밀성은 0.07-3.37%, 0.58-1.37% 수준으로 5% 이하의 우수한 정밀성을 보였다. 정확성 측정결과 quercetin-3-O gentiobioside 및 isoquercitrin의 일내 정확성은 104.87- 109.64%, 108.50-109.70%를 나타내었으며, 일간 정확성은106.69-111.08%, 106.85-109.06% 수준으로 우수한 정확성을 나타내었다. Quercetin-3-O-gentiobioside 및 isoquercitrin 의 검출한계는 각각 0.24 μg/mL, 0.16 μg/mL이었고 정량한계는 0.71 μg/mL, 0.49 μg/mL로 나타내어, 낮은 농도에서도 검출이 가능함을 확인하였다. 확립된 분석법은 특이성, 직선성, 정밀성, 정확성, 검출한계 및 정량한계에 대한분석법 검증결과가 모두 우수한 분석법임을 증명하였다. 또한 검증된 분석법을 이용하여 오크라 분말 시료 중 quercetin 3-O-gentiobioside 및 isoquercitrin의 함량분석 결과, quercetin 3-O-gentiobioside은 1.49±0.01 mg/dry weight g, isoquercitrin은1.39±0.01 mg/dry weight g의 함량을 함유하고 있는 것으로 분석되었다. 본 연구는 HPLC-PDA를 이용한 오크라의지표성분인 quercetin-3-O-gentiobioside 및 isoquercitrin의 동시분석방법이 과학적으로 신뢰성이 있는 적합한 분석방법임이 검증되었다.

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