형광 리포터를 활용한 효모 단백질 잡종 기법 개발

초록

Yeast two-hybrid는 특정 단백질에 대한 상호작용 파트너단백질의 선별을 위한 방법으로 개발되었다. 하지만 대규모단백질 상호작용체 분석을 수행하기에 요구되는 노동과 대량의 한천배지 사용에 따른 문제에 의해 널리 사용되지 못하고있다. 따라서 본 연구에서는 새로운 리포터 시스템을 yeast two-hybrid 방법에 도입하여 fluorescence-activated cell sorting (FACS) 또는 magnetic-activated cell sorting (MACS)를 이용하여 상호작용 파트너 단백질을 포함하는 효모 클론을 손쉽게선별할 수 있도록 하였다. 새로운 리포터 시스템은 c-myc 항원결정기가 총 10번 반복되는 형태로 효모 표면에 발현되도록하였으며, p53과 SV40 T항원을 이용한 실험을 통하여 리포터단백질의 정상적인 발현을 flow cytometry 분석을 통하여 확인하였다. 따라서, 새로운 리포터 시스템을 도입한 yeast twohybrid 방법은 대규모 상호작용체 분석을 위해 필요한 노력을 현저히 줄일 수 있을 것으로 기대한다.

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