Xenopus oocyte에서 애기장대 AtPIP2-1 활성측정을 위한 발현 최적화 조건 규명

초록

Xenopus oocyte을 이용하여 식물 aquaporin 단백질의 물 흡수 활성을 측정하기 위한 최적의 조건을 확립하기 위하여 애기 장대의 AtPIP2-1유전자를 클로닝하여 cRNA 제작용 vector, buffer osmolarity, hypoosmotic shock 처리 시간, 발현 단백질의 localization등을 검토한 결과, Xenopus β-globin 유전자의 5' 과 3' UTR(untranlation region)염기서열을 갖고 있는 pGEMHE vector가 단백질 생산에 더욱 효과적이며, 이 vector를 사용하였을 경우 hypoosomotic stress는 1/2ND buffer에서 6분간 처리시 가장 큰 차이를 볼 수 있었으며, 애기장대 AtPIP2-1단백질과 GFP를 결합시켜 발현시킬 경우 GFP가 plasmamembrane에 위치하는 것을 보아 올바른 subcelluar localization이 이루어지는 것을 확인할 수 있었다.

키워드